RealPAGE TBE-PAGE核酸非變性電泳預制膠
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名(ming)稱
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規(gui)格
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RealPAGE TBE-PAGE核(he)酸非(fei)變性電泳預(yu)制膠(jiao)（12孔）
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10板/盒(he)
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● 產品介紹：
RealPAGE TBE-PAGE核酸非變性(xing)(xing)電泳(yong)預制(zhi)膠適用(yong)(yong)于20-2,000 bp雙鏈(lian)DNA或20-2,000 nt單鏈(lian)DNA的核酸電泳(yong)，適合用(yong)(yong)于 DNA電泳(yong)應用(yong)(yong)領(ling)域，包(bao)括(kuo)分(fen)(fen)析限制(zhi)性(xing)(xing)酶切、PCR產物(wu)、DNA印跡(ji)分(fen)(fen)析和引物(wu)分(fen)(fen)析。是(shi)一款安全(quan)、快捷、高性(xing)(xing)能的預制(zhi)凝(ning)膠，即開即用(yong)(yong)無需自行配置各種試劑及灌(guan)膠操作(zuo)，核酸條帶均一性(xing)(xing)好，分(fen)(fen)辨率高。兼容市場(chang)上(shang)主(zhu)流的 mini 電泳(yong)槽， 如 Bio-Rad，天能，六一和君意(yi)東方等。
產品參數：
預制(zhi)膠板尺(chi)寸：長10 cm，寬8.2 cm，厚度(du)為4 mm
預制膠尺寸：長 8.2 cm，寬 7.2 cm，厚度(du)為1.1 mm
梳孔：12 孔
包裝規格：10板/盒(he)
最大上樣量：30 μl（12 孔）
● 產品貨號及選擇：
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貨號
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分離膠(jiao)濃度
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孔數
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最大上(shang)樣量
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電泳(yong)緩沖(chong)液
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最佳分離范(fan)圍
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溴酚藍位置
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RTH5101-0005
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5%
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12
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30 μl
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1×TBE
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200-2000 bp
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~70 nt
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RTH5101-0010
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10%
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12
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30 μl
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1×TBE
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50-1500 bp
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~35 nt
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RTH5101-0015
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15%
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12
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30 μl
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1×TBE
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20-1000 bp
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~20 nt
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● 貯存、效期及運輸：
預制膠4-8℃貯存，切勿置于0oC以下冷凍；有效期30天；常溫運輸。
● 使用說明：
一. 樣品準備：
1.1 DNA樣品按照(zhao)5：1體積加入6×非變性PAGE DNA上(shang)樣緩沖液（貨號(hao)：DL070），混勻后上(shang)樣。 建議每孔上(shang)樣0.2-0.5 μg左右即可。
1.2 TBE- PAGE非變性(xing)電泳雙(shuang)鏈(lian)DNA Marker可以(yi)選(xuan)擇10 bp DNA ladder（10-100 bp）（貨號(hao)(hao)：RTM443）或(huo)20 bp DNA ladder（20-500 bp）（貨號(hao)(hao)：RTM441）或(huo)25 bp DNA ladder（25-500bp）（貨號(hao)(hao)：RTM444）作為分(fen)子量標準(zhun)；單鏈(lian)DNA Marker可以(yi)選(xuan)擇單鏈(lian)DNA Marker（20-75 nt）非預混型（貨號(hao)(hao)：RTM507）或(huo)單鏈(lian)DNA Marker（10-75 nt）非預混型（貨號(hao)(hao)：RTM509）。
二. 電泳液的準備：
取 5×TBE（貨號(hao)：TB001），加入去離子水稀釋(shi)為1×，制(zhi)備(bei)成(cheng)1×TBE buffer或自(zi)行配制(zhi)1×TBE。1×TBE電泳緩沖液配制(zhi)方法(fa)：
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終(zhong)濃度
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順序
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原料(liao)
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1升
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5 升(sheng)
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89 mM
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1
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Tris堿(jian) [MW121.14]
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10.8 克
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54克
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2 mM
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2
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EDTA 2Na·2H2O [MW372.24]
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0.744 克
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3.72克
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89 MM
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3
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硼酸 [MW61.83]
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5.5 克
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27.5克
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4
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超純水最后定容至
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1 升
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5 升(sheng)
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最后pH在8.2-8.3之(zhi)間(jian)，可以不用調節pH，記錄每批pH
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三. 電泳：
3.1 將(jiang)預制膠從包(bao)裝(zhuang)(zhuang)袋(dai)中取出(chu)，裝(zhuang)(zhuang)入(ru)兼容(rong)的電泳(yong)槽中，加入(ru)電泳(yong)緩沖液，再緩慢地將(jiang)梳子拔出(chu)。
注：伯樂Mini III或(huo)Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一(yi)24K系(xi)列(lie)電(dian)泳(yong)(yong)槽請(qing)確保密封條的安裝方向（如圖）。六一(yi)其他(ta)系(xi)列(lie)，君意東方JY-SCZ2/4，百(bai)晶BG-verMINI，Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)等電(dian)泳(yong)(yong)槽可以直接使用預制膠。不兼容Thermol系(xi)列(lie)電(dian)泳(yong)(yong)槽。
3.2內槽加滿電泳液，外槽加入電泳液沒過電泳槽底部的陽極即可，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次。
3.3 上樣(yang)：在梳孔內加(jia)入(ru)適當濃度(du)和體積的樣(yang)品。建議每孔上樣(yang)0.2-0.5 μg左右(you)即可(ke)。
注：最佳上(shang)樣量須通過實驗來確定，樣品(pin)過量較易導致條帶拖尾。
3.4 將(jiang)電泳槽蓋子蓋好(hao)，并將(jiang)電源(yuan)線(xian)插頭插入電泳儀電源(yuan)插孔(紅(hong)對(dui)紅(hong)，黑(hei)對(dui)黑(hei))。一般在150V電壓，電泳50-90分鐘，根據溴酚藍(lan)的(de)位置大體判斷條帶大小(xiao)位置，停止電泳。
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恒電壓
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起(qi)始電(dian)流
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結束電流(liu)
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電泳時間
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適用(yong)條件(jian)
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推薦電壓
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150V
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15-20 mA/板膠
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5-10 mA/板膠
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60+ min
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最(zui)佳(jia)電壓，最(zui)優的分辨率
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非變性膠(jiao)濃度
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溴酚藍
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二甲苯(ben)菁
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5%
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~70 nt
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~250 nt
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10%
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~35 nt
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~120 nt
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15%
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~20 nt
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~75 nt
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3.5 取(qu)出(chu)玻璃膠(jiao)板，稍加用力慢慢扳開(kai)或用刮板輕輕撬開(kai)玻璃膠(jiao)板，將凝膠(jiao)取(qu)出(chu)。
四. 染色：
使用(yong)核(he)酸染(ran)料(liao)染(ran)色，RealSafe Red（貨號：GR002）或RealSafe All（貨號：GR004）核(he)酸染(ran)料(liao)結合(he)核(he)酸效(xiao)果最(zui)佳，強烈建議使用(yong)以(yi)便獲(huo)得(de)最(zui)佳效(xiao)果的膠圖。
以下程序(xu)用RealSafe Red核酸染料(貨號(hao):GR002)進行染色。
4.1 漂(piao)(piao)洗：拆下凝膠后，適量(liang)蒸餾(liu)水漂(piao)(piao)洗3-5分(fen)鐘。
4.2 染(ran)色液配制：
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即用型RealSafe Red核酸染色液(ye)配制(zhi)
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1×TBE
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RealSafe Red核酸染料
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10-20 μl
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4.3 染色：
凝膠浸泡(pao)于即用型染色液中(zhong)，常溫避光搖(yao)床40-60 rpm 染色30 分鐘。
4.4 觀察：
紫(zi)外(wai)燈或藍光儀上觀察條帶(dai)。
遷移示意圖：
● 實驗示例：
