5% RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預制膠
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名稱
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貨號(hao)
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規(gui)格
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5% RealPAGE
TBE-尿素-PAGE核(he)酸變(bian)性電泳預(yu)制膠(jiao)
（12孔）
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RTH5102-0005
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10板/盒
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● 產品(pin)介紹：
RealPAGE TBE-尿素(su)-PAGE核酸變性(xing)電(dian)(dian)泳(yong)預制膠(jiao)適用(yong)于 10-1000 個堿(jian)基長度的單鏈 DNA或 RNA的分析和純化(hua)，可用(yong)于合(he)成寡核苷酸分析和純化(hua)、RNA 酶保護(hu)實驗、體外(wai)轉錄研究和 RNA 印跡實驗等(deng)。是一款安(an)全、快捷、高(gao)性(xing)能的預制凝膠(jiao)，即(ji)開即(ji)用(yong)無需自(zi)行配(pei)置各種試(shi)劑及灌(guan)膠(jiao)操作，采用(yong)全自(zi)動化(hua)灌(guan)膠(jiao)技術，大大降低(di)批間(jian)差異。核酸條帶均一性(xing)好(hao)，分辨(bian)率(lv)高(gao)。兼容市場上主(zhu)流的 mini 電(dian)(dian)泳(yong)槽， 如(ru)
Bio-Rad，天能，六一和君意東(dong)方等(deng)。
產品(pin)參數(shu)：
預(yu)制膠板(ban)尺寸：長 9.8 cm，寬8.4 cm，厚度為4.1
mm
預制(zhi)膠尺(chi)寸：長 8.1 cm，寬
7.4 cm，厚度為1.1 mm
梳(shu)孔：12 孔
包裝規(gui)格：10板/盒
最大(da)上樣量：30 μl（12 孔(kong)）
● 產品貨號(hao)及選(xuan)擇(ze)：
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貨號
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分離膠濃(nong)度
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孔(kong)數
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最(zui)大上樣量(liang)
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電泳緩沖(chong)液
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最佳分離范(fan)圍
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溴(xiu)酚藍位(wei)置
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RTH5102-0005
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5%
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12
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30 μl
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1×TBE
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200-1000 nt
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~35 nt
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RTH5102-0010
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10%
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12
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30 μl
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1×TBE
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25-350 nt
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~15 nt
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RTH5102-0015
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15%
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12
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30 μl
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1×TBE
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10-150 nt
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~10 nt
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● 貯存(cun)、效期及(ji)運(yun)輸(shu)：
預制膠4-8℃貯存，切勿置于(yu)0oC以(yi)下(xia)冷凍；有(you)效期30天；常溫(wen)運輸。
● 使用(yong)說(shuo)明：
一. 樣品準備：
1.1單鏈DNA樣品加入(ru)等體積的2×TBE尿(niao)素上(shang)(shang)樣緩沖液（用于(yu)尿(niao)素變性膠）（貨號：DL080）；RNA樣品加入(ru)等體積的2×RNA上(shang)(shang)樣緩沖液 (尿(niao)素變性膠，RNase-free) （貨號：RTE4103-05）；70℃孵育5分鐘以(yi)充分變性核(he)酸以(yi)打開核(he)酸的二級結構(gou)，立(li)即(ji)置于(yu)冰(bing)水浴中。 建(jian)議每孔上(shang)(shang)樣0.2-0.5 μg左(zuo)右即(ji)可。
1.2 TBE-尿素-PAGE電泳可以選擇單鏈(lian)DNA Marker（25-75
nt）（貨號(hao)(hao)：RTM501）或單鏈(lian)DNA
Marker （15-120nt）（貨號(hao)(hao)：RTM506）或單鏈(lian)DNA Marker（10-75
nt）預混型(xing)（貨號(hao)(hao)：RTM 508）作為分子(zi)量標準。
二. 電泳液的準備：
取(qu) 5×TBE（貨號：TB001），加入去離子水稀釋為1×，制備成(cheng) 1×TBE buffer。對(dui)于RNA樣品(pin)電泳，取(qu)5×TBE（RNase-free）（貨號：TB001F），加入RNase-free水/DEPC水（貨號：RF001-02）稀釋為 1×，制備成 1×TBE buffer。
1×TBE電泳緩沖液配制方法
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終濃度
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順序
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原料(liao)
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1升(sheng)
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5 升
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89 mM
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1
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Tris堿 [MW121.14]
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10.8 克
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54克
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2 mM
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2
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EDTA 2Na·2H2O [MW372.24]
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0.744 克
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3.72克
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89 MM
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3
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硼酸(suan) [MW61.83]
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5.5 克
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27.5克
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4
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超(chao)純水最(zui)后定容至
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1 升
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5 升
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最(zui)后(hou)pH在8.2-8.3之間，可以不用調(diao)節pH，記(ji)錄每(mei)批pH
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三. 電(dian)泳：
3.1 將預制膠從(cong)包(bao)裝(zhuang)袋中(zhong)取出，裝(zhuang)入(ru)兼容的電(dian)泳槽中(zhong)，加入(ru)電(dian)泳緩(huan)沖液，再緩(huan)慢地將梳(shu)子拔出。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能(neng)VE-180，六一24K系(xi)列電泳槽請確保(bao)密封條的安裝方向（下圖(tu)）。
六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI，Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)等電泳(yong)槽可(ke)以直接使(shi)用預制膠。不(bu)兼容Thermol系列電泳(yong)槽。
3.2內(nei)槽加滿電泳(yong)液，外槽加入電泳(yong)液沒過電泳(yong)槽底部的陽極即(ji)可(ke)，用1×TBE緩沖(chong)液(ye)徹底沖(chong)洗加樣孔2-3次，去(qu)除(chu)殘余的尿素。
3.3 上樣(yang)：在梳孔內(nei)加入(ru)適當濃度和體積(ji)的(de)樣(yang)品。
注：最佳(jia)上樣量須通(tong)過實驗來確(que)定，樣品過量較易導(dao)致條帶拖(tuo)尾。
3.4 將電(dian)泳槽蓋(gai)子蓋(gai)好，并將電(dian)源(yuan)線插頭插入電(dian)泳儀電(dian)源(yuan)插孔(紅對(dui)紅，黑對(dui)黑)。一般(ban)在150V電(dian)壓，電(dian)泳50-90分鐘，根據(ju)溴酚(fen)藍的位置大體(ti)判斷條帶(dai)大小位置，停止電(dian)泳。
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恒電壓
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起(qi)始電流
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結束(shu)電流
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電泳時間
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適(shi)用條件
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推薦(jian)電壓
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150V
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15-20 mA/板膠
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5-10 mA/板膠(jiao)
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60+ min
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最(zui)佳電壓，最(zui)優的(de)分辨率
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變性(xing)膠濃度
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溴酚藍
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二甲苯(ben)菁
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5%
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~35 nt
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~130 nt
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10%
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~15 nt
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~55 nt
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15%
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~10 nt
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~52 nt
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3.5 取(qu)出(chu)玻(bo)璃(li)膠板(ban)，稍加用(yong)力慢慢扳開或(huo)用(yong)刮板(ban)輕輕撬開玻(bo)璃(li)膠板(ban)，將(jiang)凝膠取(qu)出(chu)。
四(si). 染(ran)色：
單鏈DNA或(huo)RNA樣品(pin)可以(yi)用單鏈DNA PAGE電(dian)泳染(ran)色(se)(se)試(shi)劑(ji)盒(he)(he)（貨號：RTS5103），核酸(suan)(suan)PAGE電(dian)泳染(ran)色(se)(se)試(shi)劑(ji)盒(he)(he)（貨號：RTS5102）或(huo)核酸(suan)(suan)快速高靈敏(min)度染(ran)色(se)(se)試(shi)劑(ji)盒(he)(he)（貨號：RTS5101）染(ran)色(se)(se)均可以(yi)得(de)到清晰的條帶分離效(xiao)果(guo)(guo)。注：如果(guo)(guo)使用核酸(suan)(suan)染(ran)料染(ran)色(se)(se)，RealSafe Red（貨號：GR002）或(huo)RealSafe All（貨號：GR004）核酸(suan)(suan)染(ran)料結合單鏈核酸(suan)(suan)效(xiao)果(guo)(guo)最佳(jia)，強烈建議使用以(yi)便獲(huo)得(de)最佳(jia)效(xiao)果(guo)(guo)的膠(jiao)圖。其(qi)余染(ran)料如GelRed，Goldview，EB等(deng)染(ran)色(se)(se)效(xiao)果(guo)(guo)不(bu)好。
以下(xia)程序用RealSafe Red核酸染料(貨號:GR002)進行染色。
4.1
漂(piao)洗(xi)：拆下凝膠后(hou)，適(shi)量蒸餾(liu)水漂(piao)洗(xi)3-5分鐘。
4.2
染色(se)液配(pei)制：
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即用型(xing)RealSafe Red核酸(suan)染色(se)液配制
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1×TBE
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RealSafe Red核酸染料
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10-20 μl
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4.3 染(ran)色：
凝膠(jiao)浸泡于即用型染色(se)液中，常溫避光搖床(chuang)40-60 rpm 染色(se)30 分鐘。
4.4 觀察：
紫(zi)外燈或(huo)藍(lan)光儀上觀察條帶。
● 實驗示例：