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15% RealPAGE TBE-尿素(su)-PAGE核酸變性電泳預制(zhi)膠

● 產品介紹：

RealPAGE TBE-尿(niao)素-PAGE核(he)酸(suan)變性(xing)電泳預(yu)制(zhi)膠適(shi)用于 10-1000 個(ge)堿基長度(du)的(de)(de)單鏈 DNA或 RNA的(de)(de)分析和(he)純化(hua)，可(ke)用于合成(cheng)寡核(he)苷酸(suan)分析和(he)純化(hua)、RNA 酶保(bao)護實驗、體(ti)外轉錄研究和(he) RNA 印跡實驗等。是一款安全、快捷(jie)、高性(xing)能(neng)的(de)(de)預(yu)制(zhi)凝膠，即開即用無需(xu)自行配置各種試(shi)劑及(ji)灌膠操作，采用全自動化(hua)灌膠技術，大(da)大(da)降低批間差異。核(he)酸(suan)條帶均一性(xing)好(hao)，分辨率高。兼容市場上主流的(de)(de) mini 電泳槽， 如 Bio-Rad，天能(neng)，六(liu)一和(he)君意東方等。

產(chan)品參數：

預(yu)制膠板尺寸：長 9.8 cm，寬8.4 cm，厚度為4.1 mm

預制膠尺寸：長 8.1 cm，寬(kuan)  7.4 cm，厚度(du)為1.1 mm

梳孔(kong)：12 孔(kong)

包裝規格：10板/盒

最大上樣量(liang)：30 μl（12 孔）

● 產品貨號(hao)及選擇：

● 貯存、效期及(ji)運輸：

    預制膠4-8℃貯存(cun)，切勿置于0oC以下冷凍；有效(xiao)期30天；常溫運輸(shu)。

● 使用說明：

一. 樣品準備：

1.1單鏈DNA樣(yang)(yang)品(pin)加(jia)入等體(ti)積(ji)的2×TBE尿(niao)素上樣(yang)(yang)緩(huan)沖(chong)液(ye)（用于尿(niao)素變性(xing)膠）（貨(huo)號：DL080）；RNA樣(yang)(yang)品(pin)加(jia)入等體(ti)積(ji)的2×RNA上樣(yang)(yang)緩(huan)沖(chong)液(ye) (尿(niao)素變性(xing)膠，RNase-free) （貨(huo)號：RTE4103-05）；70℃孵育5分鐘(zhong)以(yi)充分變性(xing)核(he)酸以(yi)打開核(he)酸的二級結構，立即置于冰水浴中。 建議每孔上樣(yang)(yang)0.2-0.5 μg左(zuo)右(you)即可。

1.2 TBE-尿素-PAGE電(dian)泳可以選擇單(dan)鏈DNA Marker（25-75 nt）（貨號：RTM501）或(huo)單(dan)鏈DNA Marker （15-120nt）（貨號：RTM506）或(huo)單(dan)鏈DNA Marker（10-75 nt）預混型（貨號：RTM 508）作為(wei)分(fen)子量標準。

二. 電(dian)泳液的準(zhun)備：

取 5×TBE（貨號：TB001），加入去離(li)子水稀釋為1×，制備成 1×TBE buffer。對于(yu)RNA樣品電(dian)泳，取5×TBE（RNase-free）（貨號：TB001F），加入RNase-free水/DEPC水（貨號：RF001-02）稀釋為(wei) 1×，制備成  1×TBE buffer。

1×TBE電泳緩沖液配制方法

三. 電泳：

3.1 將預制膠從(cong)包裝(zhuang)袋(dai)中取(qu)出，裝(zhuang)入(ru)兼(jian)容的電(dian)泳槽(cao)中，加入(ru)電(dian)泳緩(huan)沖液，再(zai)緩(huan)慢地將梳(shu)子(zi)拔出。

注：伯(bo)樂(le)Mini III或(huo)Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一(yi)24K系(xi)列電(dian)泳槽(cao)請確保密封條的安裝方(fang)向（下圖(tu)）。

六一其他系(xi)列，君意東方(fang)JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI，Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)等電泳槽(cao)可以(yi)直(zhi)接使(shi)用預制膠。不兼(jian)容Thermol系(xi)列電泳槽(cao)。

3.2內槽加(jia)滿電泳液(ye)，外槽加(jia)入電泳液(ye)沒過(guo)電泳槽底部(bu)的陽極即可，用1×TBE緩沖液徹(che)底沖洗加樣孔2-3次，去除殘余的(de)尿素。

3.3 上樣：在(zai)梳(shu)孔內加入適當濃(nong)度(du)和體積的樣品(pin)。

注：最佳上樣量須通過實驗來確定，樣品過量較易導致條帶拖尾。

3.4 將電(dian)(dian)泳(yong)(yong)槽蓋(gai)子蓋(gai)好，并將電(dian)(dian)源(yuan)線(xian)插(cha)頭插(cha)入電(dian)(dian)泳(yong)(yong)儀電(dian)(dian)源(yuan)插(cha)孔(紅(hong)(hong)對(dui)紅(hong)(hong)，黑(hei)對(dui)黑(hei))。一(yi)般在150V電(dian)(dian)壓，電(dian)(dian)泳(yong)(yong)50-90分鐘，根據溴酚藍的(de)位置大體(ti)判斷條(tiao)帶大小位置，停(ting)止電(dian)(dian)泳(yong)(yong)。

3.5 取(qu)出玻璃(li)膠(jiao)(jiao)板(ban)，稍加用力慢(man)慢(man)扳開或(huo)用刮(gua)板(ban)輕(qing)輕(qing)撬開玻璃(li)膠(jiao)(jiao)板(ban)，將凝膠(jiao)(jiao)取(qu)出。

四(si). 染(ran)色：

單(dan)鏈DNA或RNA樣品可(ke)以(yi)用(yong)(yong)單(dan)鏈DNA PAGE電泳染(ran)(ran)(ran)色試(shi)劑盒(he)（貨(huo)(huo)號：RTS5103），核酸(suan)PAGE電泳染(ran)(ran)(ran)色試(shi)劑盒(he)（貨(huo)(huo)號：RTS5102）或核酸(suan)快速(su)高(gao)靈敏(min)度(du)染(ran)(ran)(ran)色試(shi)劑盒(he)（貨(huo)(huo)號：RTS5101）染(ran)(ran)(ran)色均可(ke)以(yi)得到清晰的(de)條(tiao)帶分離效(xiao)果(guo)。注：如(ru)果(guo)使用(yong)(yong)核酸(suan)染(ran)(ran)(ran)料(liao)染(ran)(ran)(ran)色，RealSafe Red（貨(huo)(huo)號：GR002）或RealSafe All（貨(huo)(huo)號：GR004）核酸(suan)染(ran)(ran)(ran)料(liao)結合單(dan)鏈核酸(suan)效(xiao)果(guo)最(zui)佳(jia)，強烈建議(yi)使用(yong)(yong)以(yi)便獲得最(zui)佳(jia)效(xiao)果(guo)的(de)膠圖。其(qi)余(yu)染(ran)(ran)(ran)料(liao)如(ru)GelRed，Goldview，EB等染(ran)(ran)(ran)色效(xiao)果(guo)不好。

以下程(cheng)序用RealSafe Red核酸染(ran)料(貨號(hao):GR002)進行(xing)染(ran)色(se)。

4.1  漂洗：拆下凝膠后，適量蒸餾(liu)水漂洗3-5分鐘。

4.2  染色液配制：

4.3 染色：

凝膠浸泡于即(ji)用型染色液(ye)中，常溫避光搖床40-60 rpm  染色30 分鐘。

4.4 觀(guan)察：

紫(zi)外燈或藍(lan)光儀上觀察條帶。

● 實驗示例：