細胞增殖-毒性檢測試劑盒
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
● 產品組成：
|
組分貨號
|
名稱(cheng)
|
規格(ge)
|
貯存
|
|
CK0115-01
|
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
|
1 ml（100次）
|
4℃，避光保存
|
|
CK0115-02
|
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
|
5×1 ml（500次）
|
4℃，避光保存
|
|
CK0115-03
|
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
|
25 ml（2500次）
|
4℃，避光保(bao)存
|
|
CK0115-04
|
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
|
100 ml（10000次）
|
4℃，避(bi)光保存
|
● 產品簡介：
CCK-8試(shi)劑(ji)盒(he)，是(shi)一種(zhong)基于(yu)WST-8的(de)廣泛應用于(yu)細(xi)胞(bao)(bao)增殖和(he)細(xi)胞(bao)(bao)毒性的(de)快(kuai)速高靈(ling)敏度檢測試(shi)劑(ji)盒(he)。 WST-8是(shi)一種(zhong)類似于(yu) MTT的(de)化合(he)(he)物，在電子(zi)耦合(he)(he)試(shi)劑(ji)1-Methoxy PMS存在的(de)情況下(xia)，可以被(bei)還原生成橙黃色水溶性的(de)甲(jia)臜（Formazan）。細(xi)胞(bao)(bao)增殖越多越快(kuai)，則顏色越深；細(xi)胞(bao)(bao)毒性越大(da)，則顏色越淺。對(dui)于(yu)同樣的(de)細(xi)胞(bao)(bao)，顏色的(de)深淺和(he)細(xi)胞(bao)(bao)數目(mu)呈(cheng)線性關系。
WST-8與傳(chuan)統的(de)MTT，XTT，MTS，WST-1相比(bi)有明顯(xian)的(de)優點(dian)。首(shou)先，反(fan)應(ying)生(sheng)成(cheng)的(de)formazan是水溶(rong)性的(de)，可(ke)以省去(qu)后(hou)續的(de)溶(rong)解步驟。其(qi)次，WST-8更(geng)加穩定，檢測(ce)線性范圍更(geng)寬，靈敏(min)度更(geng)高。
本試劑盒可以用于(yu)細(xi)(xi)胞因子等(deng)誘(you)導(dao)的(de)細(xi)(xi)胞增(zeng)殖(zhi)檢測，也(ye)可以用于(yu)抗癌藥(yao)物等(deng)對細(xi)(xi)胞有毒試劑誘(you)導(dao)的(de)細(xi)(xi)胞毒性檢測，或(huo)一(yi)些(xie)藥(yao)物誘(you)導(dao)的(de)細(xi)(xi)胞生長抑(yi)制檢測。
本試劑盒檢(jian)(jian)測便捷(jie)，使用(yong)(yong)方便。僅含一管已經配制(zhi)(zhi)好的(de)(de)含有WST-8的(de)(de)CCK-8溶液，無須(xu)再進行任何配制(zhi)(zhi)等操作。無須(xu)使用(yong)(yong)同位素，所有的(de)(de)檢(jian)(jian)測步(bu)驟僅在(zai)同一塊96孔板內完(wan)成。不必(bi)洗滌細(xi)胞，不必(bi)收集細(xi)胞，也不必(bi)采用(yong)(yong)額外(wai)的(de)(de)步(bu)驟去溶解甲臜。特別適用(yong)(yong)于(yu)大批量樣(yang)品(pin)的(de)(de)檢(jian)(jian)測。
另外，酚(fen)紅和血(xue)清對本試劑盒的測(ce)定(ding)無(wu)明顯影響。
WST-8對細胞無明顯毒性(xing)。加(jia)入CCK-8溶液顯色后，可(ke)以在不同時(shi)間(jian)反復(fu)用酶標(biao)儀讀板，使檢(jian)測時(shi)間(jian)更加(jia)靈活(huo)，便于(yu)找到最佳測定時(shi)間(jian)。
本試劑盒可以測定100個(ge)或500個(ge)樣品(pin)。
● 保存條件：
CCK-8 溶液在(zai)(zai)避(bi)光，0-5℃的條(tiao)件下可以保(bao)存一年(nian)，如長期保(bao)存，可在(zai)(zai)-20℃下保(bao)存 2 年(nian)，如需經常使(shi)用請將試劑(ji)存放在(zai)(zai) 0-5℃，為防止背景(jing)值增加(jia)干(gan)擾(rao)實驗結果，請勿反復凍融(rong)。
● 操作步驟：
1. 在(zai) 96孔(kong)板中接種(zhong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸液(100 μl /孔(kong))，通常細(xi)(xi)胞(bao)(bao)增殖實驗每(mei)孔(kong)約2000 個細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)毒
性實驗(yan)每孔約5000 個細(xi)(xi)胞(bao)，具體每孔所用的細(xi)(xi)胞(bao)的數目(mu)，需(xu)根據細(xi)(xi)胞(bao)的大小(xiao)，細(xi)(xi)胞(bao)增殖速度的快慢等因素決(jue)定(ding))。
2. 按照實驗需要，進行培養并給(gei)予0-10 μl特定(ding)的藥物刺激，處理一段適當的時間(例如: 6,12,
24或(huo)48小時)。
3. 每孔(kong)加(jia)(jia)入10 μl CCK-8 溶液(ye)(ye)。如果起始的培養(yang)(yang)(yang)體(ti)積為200 μl，則需加(jia)(jia)入20 μl CCK-8溶液(ye)(ye)，以此(ci)類推(tui)。可以用加(jia)(jia)相(xiang)應量細(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)(yang)基和 CCK-8但不加(jia)(jia)細(xi)胞(bao)的孔(kong)作(zuo)(zuo)為空(kong)(kong)白對照(zhao)，若擔心(xin)所使用的藥(yao)物(wu)會干擾檢測，需設置加(jia)(jia)相(xiang)應量細(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)、藥(yao)物(wu)和 CCK-8 溶液(ye)(ye)但不加(jia)(jia)細(xi)胞(bao)的孔(kong)作(zuo)(zuo)為空(kong)(kong)白對照(zhao)。
4. 在細胞培(pei)養箱內(nei)繼(ji)續孵育1-4小(xiao)時，具(ju)體時間可以(yi)通過預實驗確定。預實驗時可以(yi)在0.5、
2和(he)4 小時后(hou)分別用酶標儀(yi)檢測(ce)，然后(hou)選取吸光(guang)度(du)范圍比較適宜的一個時間(jian)點用于后(hou)續(xu)實(shi)驗(yan)。
5. 用酶標儀測定在(zai)450 nm處的吸(xi)光值，若無450nm濾光片，可(ke)以(yi)使用420-480nm 的濾光
片。如(ru)果樣品(pin)為(wei)高渾濁度的細胞懸(xuan)液，可以使(shi)用大于 600nm的波長(chang)，例(li)如(ru)650nm，作為(wei)參考波長(chang)進行雙波長(chang)測定。
6. 如(ru)果需要暫(zan)時(shi)不測定 OD值，可以向每孔中(zhong)加入10 μl0.1MHCl 溶(rong)液或者(zhe)1%(w/v)的(de) SDS溶(rong)液，避光保存在室溫，24 小(xiao)時(shi)內吸光度不會(hui)發生變(bian)化。
● 注意事項：
1. 使(shi)用96 孔板(ban)進行(xing)檢測時(shi)，如果細(xi)胞培養(yang)時(shi)間較長，請(qing)注意蒸發(fa)問題。可將96 孔板(ban)外圍一圈加培養(yang)基(ji)、水或 PBS保濕。同時(shi)，可以把(ba)96孔板(ban)置(zhi)于培養(yang)箱內靠近水盤的位置(zhi)以緩解蒸發(fa)。
2. 培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)根(gen)據(ju)細胞種類的不同(tong)和每孔內細胞數(shu)量(liang)的多少而不同(tong)。在(zai)正式實驗前，建議先做預(yu)實驗摸索鋪(pu)板的細胞數(shu)量(liang)以及加入CCK-8 試(shi)劑后(hou)的培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)。
3. 鋪板時(shi)請(qing)注意保證每個孔細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)均勻，建(jian)議鋪板過程中(zhong)注意時(shi)常混勻，防止(zhi)因細(xi)胞(bao)沉淀(dian)造成不均勻。加入CCK-8 后(hou)請(qing)前后(hou)左右(you)輕輕晃動培養(yang)(yang)板數(shu)次，使培養(yang)(yang)基和CCK-8 溶(rong)液(ye)充分混勻。
4. 本試劑盒的檢(jian)測(ce)依(yi)賴于脫氫酶催化(hua)的反應，如(ru)果待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)有氧化(hua)性或還原性，可(ke)(ke)在(zai)加(jia)CCK-8 之前更(geng)(geng)換(huan)新鮮(xian)培養(yang)基(ji)(ji)，去掉(diao)藥(yao)物(wu)的影響。若(ruo)藥(yao)物(wu)影響比較小的情況可(ke)(ke)以(yi)不更(geng)(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)(ji)，直接(jie)扣除(chu)培養(yang)基(ji)(ji)中(zhong)加(jia)入藥(yao)物(wu)后的空白吸收即可(ke)(ke)。
5. 加入CCK-8 時，如果細胞培養時間較長，培養基(ji)顏(yan)色或 pH值已變化，建議換(huan)用(yong)新鮮的培養基(ji)。
6. 用(yong)酶(mei)標儀檢(jian)測(ce)(ce)前(qian)需確保每個孔內沒(mei)有氣泡(pao)，否則(ze)會干擾測(ce)(ce)定。
7. 本試劑盒(he)系(xi)無菌(jun)灌裝生產。在使(shi)用(yong)過(guo)程中，請在生物安全(quan)柜內無菌(jun)操作，避免污(wu)染。
CCK-8
使(shi)用該產(chan)品發表部(bu)分文章列表：
1. [2022 IF=2.6] Upregulation of
Protease-Activated Receptor 2 Promotes Proliferation and Migration of Human
Vascular Smooth Muscle Cells (VSMCs).
Author: Mei Wei, Yongsheng Liu, Mingqi Zheng, Le Wang, Fangfang
Ma, Yanchao Qi, Gang Liu
Journal: Medicine Science Monotor. 2019; 25:
8854-8862
Institution：The First Hospital of Hebei Medical
University
Paper link：