細胞增殖-毒性檢測試劑盒
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
● 產品組成：
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組分貨號
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名(ming)稱
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規格
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貯存
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CK0115-01
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Cell Counting Kit-8(CCK-8)
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1 ml（100次）
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4℃，避(bi)光(guang)保存
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CK0115-02
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Cell Counting Kit-8(CCK-8)
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5×1 ml（500次）
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4℃，避(bi)光(guang)保存
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CK0115-03
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Cell Counting Kit-8(CCK-8)
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25 ml（2500次）
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4℃，避光(guang)保存
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CK0115-04
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Cell Counting Kit-8(CCK-8)
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100 ml（10000次）
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4℃，避光保存
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● 產品簡介：
CCK-8試劑(ji)盒(he)，是(shi)一種基于(yu)WST-8的(de)廣泛應用于(yu)細(xi)胞(bao)增殖和細(xi)胞(bao)毒(du)(du)性的(de)快速高靈敏度(du)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)。 WST-8是(shi)一種類似于(yu) MTT的(de)化合物，在電(dian)子耦合試劑(ji)1-Methoxy PMS存(cun)在的(de)情況下，可以(yi)被還原生成橙黃色水溶性的(de)甲臜(za)（Formazan）。細(xi)胞(bao)增殖越(yue)多越(yue)快，則(ze)(ze)顏色越(yue)深；細(xi)胞(bao)毒(du)(du)性越(yue)大，則(ze)(ze)顏色越(yue)淺(qian)。對于(yu)同樣的(de)細(xi)胞(bao)，顏色的(de)深淺(qian)和細(xi)胞(bao)數目呈線(xian)性關系。
WST-8與傳(chuan)統的(de)MTT，XTT，MTS，WST-1相比(bi)有明(ming)顯的(de)優點。首先，反應生成的(de)formazan是水(shui)溶性(xing)的(de)，可以(yi)省去(qu)后續的(de)溶解步驟(zou)。其次，WST-8更(geng)(geng)加穩定，檢測(ce)線性(xing)范(fan)圍更(geng)(geng)寬(kuan)，靈敏(min)度更(geng)(geng)高。
本(ben)試(shi)劑(ji)盒可(ke)以用(yong)(yong)于細胞(bao)(bao)因子(zi)等誘(you)導的細胞(bao)(bao)增殖檢(jian)測(ce)，也可(ke)以用(yong)(yong)于抗癌(ai)藥物(wu)等對細胞(bao)(bao)有毒試(shi)劑(ji)誘(you)導的細胞(bao)(bao)毒性檢(jian)測(ce)，或一些藥物(wu)誘(you)導的細胞(bao)(bao)生長抑制檢(jian)測(ce)。
本試劑盒檢(jian)測便(bian)捷(jie)，使用方便(bian)。僅(jin)含(han)一管(guan)已經(jing)配制(zhi)好的(de)含(han)有WST-8的(de)CCK-8溶液，無須再進行任何(he)配制(zhi)等操(cao)作。無須使用同(tong)位素，所有的(de)檢(jian)測步(bu)驟僅(jin)在同(tong)一塊96孔(kong)板(ban)內完成。不必(bi)(bi)洗滌細胞，不必(bi)(bi)收集細胞，也不必(bi)(bi)采(cai)用額外的(de)步(bu)驟去(qu)溶解甲臜。特別適用于大批量樣品的(de)檢(jian)測。
另外，酚紅和血清對(dui)本試劑(ji)盒的測定(ding)無明顯影響。
WST-8對細胞(bao)無明(ming)顯毒性(xing)。加入CCK-8溶(rong)液顯色后，可以在不同(tong)時間反復用(yong)酶標儀讀板，使檢測時間更(geng)加靈活(huo)，便于找到最佳測定時間。
本試劑盒可以測(ce)定(ding)100個或500個樣品。
● 保存條件：
CCK-8 溶(rong)液在(zai)(zai)避光，0-5℃的條件下可(ke)以保存一年，如長期保存，可(ke)在(zai)(zai)-20℃下保存 2 年，如需經(jing)常(chang)使用請(qing)將(jiang)試劑存放在(zai)(zai) 0-5℃，為(wei)防止背景值增加干(gan)擾實驗結果(guo)，請(qing)勿反復凍融(rong)。
● 操作步驟：
1. 在 96孔板中接種細(xi)(xi)胞懸液(100 μl /孔)，通常細(xi)(xi)胞增(zeng)殖實(shi)驗(yan)每孔約2000 個細(xi)(xi)胞，細(xi)(xi)胞毒
性實驗每孔約5000 個細(xi)胞(bao)，具體(ti)每孔所用的(de)細(xi)胞(bao)的(de)數(shu)目，需根據細(xi)胞(bao)的(de)大小，細(xi)胞(bao)增(zeng)殖(zhi)速(su)度(du)的(de)快慢等(deng)因素決定)。
2. 按照實(shi)驗(yan)需要，進(jin)行培養(yang)并給予0-10 μl特定的藥(yao)物刺激(ji)，處(chu)理一段適當(dang)的時間(例如: 6,12,
24或48小時)。
3. 每(mei)孔加(jia)(jia)入10 μl CCK-8 溶液。如果起(qi)始的培養體積為200 μl，則需(xu)加(jia)(jia)入20 μl CCK-8溶液，以此類(lei)推。可以用加(jia)(jia)相(xiang)應(ying)量細(xi)胞(bao)培養基和 CCK-8但不(bu)加(jia)(jia)細(xi)胞(bao)的孔作(zuo)(zuo)為空白(bai)對照(zhao)，若擔(dan)心所使用的藥(yao)物(wu)(wu)會干(gan)擾檢測，需(xu)設置(zhi)加(jia)(jia)相(xiang)應(ying)量細(xi)胞(bao)培養液、藥(yao)物(wu)(wu)和 CCK-8 溶液但不(bu)加(jia)(jia)細(xi)胞(bao)的孔作(zuo)(zuo)為空白(bai)對照(zhao)。
4. 在(zai)細胞培養箱內繼續孵育1-4小(xiao)時，具體時間可以通過預(yu)實(shi)驗確定。預(yu)實(shi)驗時可以在(zai)0.5、
2和4 小時后分別用酶(mei)標儀(yi)檢測，然后選取吸光度(du)范圍(wei)比較適宜的一個時間點用于后續實驗(yan)。
5. 用(yong)酶標儀(yi)測定在450 nm處的吸光值，若無450nm濾(lv)光片，可以使用(yong)420-480nm 的濾(lv)光
片(pian)。如果樣品為高(gao)渾濁度的細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，可(ke)以使用大于 600nm的波長(chang)，例(li)如650nm，作為參考波長(chang)進(jin)行(xing)雙波長(chang)測(ce)定。
6. 如果(guo)需要(yao)暫(zan)時不(bu)測定 OD值，可以(yi)向(xiang)每(mei)孔中加入10 μl0.1MHCl 溶液(ye)或者(zhe)1%(w/v)的 SDS溶液(ye)，避光(guang)保存(cun)在室溫(wen)，24 小時內(nei)吸(xi)光(guang)度不(bu)會(hui)發生變化(hua)。
● 注意事項：
1. 使用96 孔(kong)板進行檢測時(shi)，如果(guo)細胞培養(yang)時(shi)間較長，請(qing)注(zhu)意(yi)蒸發(fa)問(wen)題。可(ke)將96 孔(kong)板外(wai)圍一圈(quan)加培養(yang)基(ji)、水(shui)或 PBS保濕(shi)。同時(shi)，可(ke)以把(ba)96孔(kong)板置于培養(yang)箱內(nei)靠近水(shui)盤的(de)位置以緩解蒸發(fa)。
2. 培(pei)養時(shi)間根據細(xi)胞(bao)(bao)種類的不同和每孔(kong)內細(xi)胞(bao)(bao)數量的多(duo)少而不同。在正式實(shi)驗前，建(jian)議先做(zuo)預實(shi)驗摸索鋪(pu)板的細(xi)胞(bao)(bao)數量以及加入(ru)CCK-8 試劑(ji)后的培(pei)養時(shi)間。
3. 鋪(pu)板(ban)時請(qing)注意(yi)保證每個孔細(xi)(xi)胞數量均勻，建(jian)議鋪(pu)板(ban)過程中注意(yi)時常混(hun)(hun)勻，防止因(yin)細(xi)(xi)胞沉淀造(zao)成不均勻。加入CCK-8 后(hou)請(qing)前后(hou)左右輕輕晃動培養板(ban)數次，使培養基(ji)和CCK-8 溶(rong)液充分(fen)混(hun)(hun)勻。
4. 本試劑盒(he)的(de)檢測(ce)(ce)依(yi)賴于脫氫酶催化的(de)反應(ying)，如果待測(ce)(ce)物(wu)質有(you)氧(yang)化性或還(huan)原性，可(ke)在加CCK-8 之前更換新鮮培養基，去掉藥物(wu)的(de)影響(xiang)。若藥物(wu)影響(xiang)比較小的(de)情況(kuang)可(ke)以(yi)不更換培養基，直(zhi)接扣除培養基中加入藥物(wu)后的(de)空白吸收即可(ke)。
5. 加入CCK-8 時，如果細胞培養(yang)時間較長，培養(yang)基(ji)顏色(se)或 pH值已變化，建議換用新鮮的培養(yang)基(ji)。
6. 用酶標儀檢測前需(xu)確(que)保每個孔內沒有氣(qi)泡，否(fou)則會干擾測定。
7. 本試(shi)劑盒系無菌(jun)灌裝(zhuang)生產。在使用過程中，請在生物安全柜(ju)內無菌(jun)操作(zuo)，避(bi)免污染(ran)。
CCK-8
使用該(gai)產品發表部分文章列表：
1. [2022 IF=2.6] Upregulation of
Protease-Activated Receptor 2 Promotes Proliferation and Migration of Human
Vascular Smooth Muscle Cells (VSMCs).
Author: Mei Wei, Yongsheng Liu, Mingqi Zheng, Le Wang, Fangfang
Ma, Yanchao Qi, Gang Liu
Journal: Medicine Science Monotor. 2019; 25:
8854-8862
Institution：The First Hospital of Hebei Medical
University
Paper link：