細胞增殖-毒性檢測試劑盒
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
● 產品組成：
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組分貨號
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名稱
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規格
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貯存
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CK0115-01
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Cell Counting
Kit-8(CCK-8)
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1 ml（100次）
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4℃，避光保存
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CK0115-02
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Cell Counting
Kit-8(CCK-8)
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5×1
ml（500次(ci)）
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4℃，避(bi)光保存
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CK0115-03
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Cell Counting
Kit-8(CCK-8)
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25 ml（2500次）
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4℃，避(bi)光保存
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CK0115-04
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Cell Counting
Kit-8(CCK-8)
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100 ml（10000次(ci)）
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4℃，避光保存
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● 產品簡介：
CCK-8試劑盒(he)，是(shi)一種基于WST-8的(de)(de)廣泛應用(yong)于細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)增殖(zhi)(zhi)和(he)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)毒性的(de)(de)快速高(gao)靈敏度(du)檢測試劑盒(he)。 WST-8是(shi)一種類似于 MTT的(de)(de)化合物，在(zai)電(dian)子耦(ou)合試劑1-Methoxy PMS存在(zai)的(de)(de)情(qing)況下，可以被還原生(sheng)成橙黃色水溶性的(de)(de)甲臜（Formazan）。細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)增殖(zhi)(zhi)越(yue)多越(yue)快，則顏色越(yue)深(shen)；細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)毒性越(yue)大，則顏色越(yue)淺。對于同樣的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，顏色的(de)(de)深(shen)淺和(he)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)數目呈線性關系(xi)。
WST-8與傳統的MTT，XTT，MTS，WST-1相(xiang)比有(you)明顯的優點。首先，反應生成的formazan是水溶性(xing)(xing)的，可以省去后(hou)續的溶解步驟(zou)。其次，WST-8更加(jia)穩定，檢測線(xian)性(xing)(xing)范圍更寬，靈敏度更高。
本試劑盒可以用于細胞(bao)(bao)(bao)因子等(deng)誘(you)(you)導的(de)細胞(bao)(bao)(bao)增(zeng)殖檢測，也(ye)可以用于抗癌藥物(wu)等(deng)對細胞(bao)(bao)(bao)有毒試劑誘(you)(you)導的(de)細胞(bao)(bao)(bao)毒性檢測，或一些藥物(wu)誘(you)(you)導的(de)細胞(bao)(bao)(bao)生長抑制檢測。
本試(shi)劑(ji)盒檢(jian)測便(bian)捷，使(shi)(shi)用方(fang)便(bian)。僅含(han)一管(guan)已(yi)經配(pei)制好的(de)含(han)有WST-8的(de)CCK-8溶(rong)液，無須再進行(xing)任何配(pei)制等操(cao)作。無須使(shi)(shi)用同位素，所有的(de)檢(jian)測步(bu)驟僅在同一塊96孔板內完成。不(bu)必(bi)(bi)洗滌細胞，不(bu)必(bi)(bi)收集細胞，也不(bu)必(bi)(bi)采用額(e)外的(de)步(bu)驟去溶(rong)解甲(jia)臜。特別適用于(yu)大批量樣品的(de)檢(jian)測。
另外，酚紅和血清對本試(shi)劑盒的(de)測定無明顯影響。
WST-8對細胞無明顯(xian)毒性。加入CCK-8溶液顯(xian)色后，可以在不同時(shi)間反(fan)復用酶標儀讀板，使檢(jian)測(ce)時(shi)間更加靈(ling)活，便于(yu)找到最佳測(ce)定時(shi)間。
本試劑盒可以測定100個或500個樣品。
● 保存條件：
CCK-8 溶液在避光，0-5℃的條件下可以保存一年，如長期保存，可在-20℃下保存 2 年，如需經常使用請將試劑存放在 0-5℃，為防(fang)止背景值(zhi)增(zeng)加(jia)干(gan)擾實驗結果(guo)，請勿反復(fu)凍融。
● 操作步驟：
1. 在 96孔板(ban)中(zhong)接種(zhong)細胞懸液(100 μl /孔)，通常(chang)細胞增殖(zhi)實(shi)驗每孔約(yue)2000 個(ge)細胞，細胞毒
性實(shi)驗每孔(kong)約5000 個細(xi)胞(bao)，具(ju)體(ti)每孔(kong)所用的(de)細(xi)胞(bao)的(de)數目(mu)，需(xu)根據細(xi)胞(bao)的(de)大小，細(xi)胞(bao)增(zeng)殖速度的(de)快(kuai)慢等(deng)因素決定)。
2. 按照實驗需要，進行培養并給予0-10 μl特(te)定的(de)藥物刺激，處理一段適當的(de)時間(jian)(例如: 6,12,
24或48小時)。
3. 每孔(kong)加(jia)入(ru)10 μl CCK-8 溶(rong)液。如果起始的(de)(de)培(pei)養體(ti)積(ji)為200 μl，則需加(jia)入(ru)20 μl CCK-8溶(rong)液，以此類推。可以用加(jia)相應(ying)量細胞培(pei)養基和 CCK-8但不加(jia)細胞的(de)(de)孔(kong)作為空(kong)白(bai)對(dui)照，若擔(dan)心所使用的(de)(de)藥(yao)物會干擾檢測，需設置加(jia)相應(ying)量細胞培(pei)養液、藥(yao)物和 CCK-8 溶(rong)液但不加(jia)細胞的(de)(de)孔(kong)作為空(kong)白(bai)對(dui)照。
4. 在細(xi)胞培養箱內繼(ji)續孵(fu)育1-4小(xiao)時(shi)，具(ju)體時(shi)間可以(yi)通過(guo)預實驗(yan)確定(ding)。預實驗(yan)時(shi)可以(yi)在0.5、
2和4 小(xiao)時后(hou)分別用(yong)酶標儀檢測(ce)，然后(hou)選取吸光度(du)范圍比較(jiao)適宜的一個時間點用(yong)于后(hou)續(xu)實(shi)驗。
5. 用(yong)酶標儀(yi)測定在(zai)450 nm處的吸(xi)光(guang)值，若無450nm濾光(guang)片，可(ke)以使(shi)用(yong)420-480nm 的濾光(guang)
片。如果(guo)樣品為高渾(hun)濁度的(de)細胞(bao)懸液(ye)，可以使用大于 600nm的(de)波長(chang)(chang)，例(li)如650nm，作為參考波長(chang)(chang)進行(xing)雙波長(chang)(chang)測(ce)定。
6. 如果需要暫時不(bu)測定(ding) OD值，可以向每(mei)孔中(zhong)加入10 μl0.1MHCl 溶液或(huo)者1%(w/v)的 SDS溶液，避光保存在室(shi)溫，24 小時內吸光度不(bu)會發生變化。 ;
● 注意事項：
1. 使用96 孔板進行檢測時，如果細胞培養時間較長，請注意蒸發問(wen)題。可將96 孔板外圍一圈加培養基、水或(huo) PBS保濕。同時，可以(yi)(yi)把(ba)96孔板置于培養箱內靠近水盤的位(wei)置以(yi)(yi)緩(huan)解(jie)蒸發。
2. 培(pei)(pei)養(yang)時間根據細(xi)胞(bao)種類的不(bu)同和每孔內細(xi)胞(bao)數量的多少(shao)而不(bu)同。在(zai)正式實驗(yan)前，建(jian)議(yi)先(xian)做預實驗(yan)摸索鋪板的細(xi)胞(bao)數量以及加入CCK-8 試劑后的培(pei)(pei)養(yang)時間。
3. 鋪板時請注意(yi)保證每(mei)個孔細胞(bao)數(shu)量均(jun)勻，建議鋪板過程中注意(yi)時常混勻，防止因(yin)細胞(bao)沉淀造(zao)成不(bu)均(jun)勻。加入CCK-8 后請前后左右(you)輕輕晃動培養板數(shu)次，使(shi)培養基和CCK-8 溶液充分混勻。
4. 本(ben)試劑(ji)盒的(de)檢測依賴(lai)于脫氫酶催化(hua)的(de)反應，如果待測物(wu)質(zhi)有氧(yang)化(hua)性或還原性，可在加CCK-8 之前更換新鮮(xian)培養(yang)基(ji)，去(qu)掉藥(yao)(yao)物(wu)的(de)影響(xiang)。若藥(yao)(yao)物(wu)影響(xiang)比較小的(de)情(qing)況(kuang)可以不更換培養(yang)基(ji)，直接扣除培養(yang)基(ji)中加入藥(yao)(yao)物(wu)后的(de)空白吸收即可。
5. 加入CCK-8 時，如果細胞(bao)培(pei)養時間較(jiao)長，培(pei)養基顏色或 pH值(zhi)已變化，建議換(huan)用新鮮(xian)的培(pei)養基。
6. 用酶標儀檢測前需確保(bao)每個(ge)孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。
7. 本試劑盒系無菌灌裝生產。在使用過程中，請在生物安全柜內無菌操作，避免污染。
CCK-8
使用該產品發表(biao)部分文章列表(biao)：
1. [2022 IF=2.6] Upregulation of
Protease-Activated Receptor 2 Promotes Proliferation and Migration of Human
Vascular Smooth Muscle Cells (VSMCs).
Author: Mei Wei, Yongsheng Liu, Mingqi Zheng, Le Wang, Fangfang
Ma, Yanchao Qi, Gang Liu
Journal: Medicine Science Monotor. 2019; 25:
8854-8862
Institution：The First Hospital of Hebei Medical
University
Paper link：