細胞增殖-毒性檢測試劑盒
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
● 產品組成：
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組分貨號
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名(ming)稱
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規格
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貯存
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CK0115-01
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Cell Counting Kit-8(CCK-8)
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1 ml（100次）
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4℃，避光保存
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CK0115-02
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Cell Counting Kit-8(CCK-8)
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5×1 ml（500次）
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4℃，避光(guang)保存(cun)
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CK0115-03
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Cell Counting Kit-8(CCK-8)
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25 ml（2500次）
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4℃，避光保存
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CK0115-04
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Cell Counting Kit-8(CCK-8)
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100 ml（10000次）
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4℃，避光保存(cun)
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● 產品簡介：
CCK-8試(shi)(shi)(shi)劑(ji)盒(he)(he)，是(shi)一(yi)種(zhong)(zhong)基于(yu)WST-8的(de)廣泛應用于(yu)細(xi)胞(bao)增殖和細(xi)胞(bao)毒性(xing)的(de)快(kuai)速高靈敏度檢測試(shi)(shi)(shi)劑(ji)盒(he)(he)。 WST-8是(shi)一(yi)種(zhong)(zhong)類似于(yu) MTT的(de)化合物(wu)，在電子耦合試(shi)(shi)(shi)劑(ji)1-Methoxy PMS存在的(de)情況(kuang)下，可以(yi)被還(huan)原生成(cheng)橙黃色(se)水溶性(xing)的(de)甲(jia)臜（Formazan）。細(xi)胞(bao)增殖越多(duo)越快(kuai)，則(ze)顏色(se)越深(shen)；細(xi)胞(bao)毒性(xing)越大，則(ze)顏色(se)越淺。對于(yu)同樣的(de)細(xi)胞(bao)，顏色(se)的(de)深(shen)淺和細(xi)胞(bao)數目(mu)呈線性(xing)關系(xi)。
WST-8與傳(chuan)統的(de)MTT，XTT，MTS，WST-1相比(bi)有明顯的(de)優點。首先，反(fan)應(ying)生成的(de)formazan是水溶性(xing)的(de)，可以省(sheng)去后續的(de)溶解(jie)步(bu)驟。其次，WST-8更加穩定(ding)，檢測線性(xing)范圍更寬，靈敏度更高(gao)。
本(ben)試劑盒可以用于細(xi)(xi)(xi)胞(bao)因子等誘(you)導的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)增殖檢測(ce)(ce)，也可以用于抗癌藥(yao)物(wu)(wu)等對細(xi)(xi)(xi)胞(bao)有毒試劑誘(you)導的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)毒性檢測(ce)(ce)，或一(yi)些(xie)藥(yao)物(wu)(wu)誘(you)導的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)生長抑制檢測(ce)(ce)。
本試(shi)劑盒檢測(ce)(ce)便(bian)(bian)捷，使用方便(bian)(bian)。僅(jin)含(han)一管(guan)已經配制(zhi)好的含(han)有WST-8的CCK-8溶(rong)液，無須再(zai)進行任何配制(zhi)等操作。無須使用同位素(su)，所有的檢測(ce)(ce)步(bu)驟僅(jin)在(zai)同一塊96孔板內完成。不(bu)必洗滌細胞，不(bu)必收集細胞，也不(bu)必采(cai)用額外的步(bu)驟去溶(rong)解甲臜。特別適用于(yu)大批量樣品的檢測(ce)(ce)。
另外(wai)，酚紅和血清對本試(shi)劑(ji)盒的測定無(wu)明(ming)顯影響。
WST-8對細(xi)胞無明顯毒性。加入CCK-8溶液(ye)顯色(se)后，可以在(zai)不同(tong)時(shi)(shi)間反(fan)復用(yong)酶標儀讀板，使檢測時(shi)(shi)間更加靈活，便(bian)于找到最佳(jia)測定時(shi)(shi)間。
本試(shi)劑盒可以測定100個或500個樣品(pin)。
● 保存條件：
CCK-8 溶液(ye)在(zai)(zai)避(bi)光(guang)，0-5℃的條件下可以保存(cun)(cun)一(yi)年，如(ru)長期保存(cun)(cun)，可在(zai)(zai)-20℃下保存(cun)(cun) 2 年，如(ru)需(xu)經(jing)常使(shi)用請(qing)將試劑存(cun)(cun)放在(zai)(zai) 0-5℃，為防止背景值增加干擾實驗結果，請(qing)勿反復凍(dong)融。
● 操作步驟：
1. 在 96孔板中接種細(xi)胞(bao)(bao)懸(xuan)液(ye)(100 μl /孔)，通(tong)常細(xi)胞(bao)(bao)增殖實驗每孔約2000 個(ge)細(xi)胞(bao)(bao)，細(xi)胞(bao)(bao)毒
性實驗每孔約5000 個細(xi)胞(bao)，具體每孔所用的(de)(de)細(xi)胞(bao)的(de)(de)數目(mu)，需根據細(xi)胞(bao)的(de)(de)大小(xiao)，細(xi)胞(bao)增殖速度的(de)(de)快慢(man)等因素決定)。
2. 按照(zhao)實驗(yan)需要，進行培養并給予0-10 μl特(te)定(ding)的(de)(de)藥物刺激，處理一(yi)段適當的(de)(de)時間(例如: 6,12,
24或48小時)。
3. 每孔(kong)加(jia)入10 μl CCK-8 溶(rong)液(ye)。如(ru)果(guo)起始的(de)培養(yang)體積(ji)為200 μl，則(ze)需(xu)加(jia)入20 μl CCK-8溶(rong)液(ye)，以(yi)此(ci)類推。可以(yi)用加(jia)相應(ying)量細胞培養(yang)基和 CCK-8但不(bu)加(jia)細胞的(de)孔(kong)作為空(kong)白對照(zhao)，若擔心所使用的(de)藥(yao)物會干(gan)擾(rao)檢測，需(xu)設置加(jia)相應(ying)量細胞培養(yang)液(ye)、藥(yao)物和 CCK-8 溶(rong)液(ye)但不(bu)加(jia)細胞的(de)孔(kong)作為空(kong)白對照(zhao)。
4. 在細胞培(pei)養箱內繼續孵(fu)育1-4小時(shi)，具體時(shi)間可以通過預實(shi)驗確定。預實(shi)驗時(shi)可以在0.5、
2和4 小時后分別用酶標(biao)儀檢測，然后選取吸光(guang)度范圍比較適宜的一個時間點(dian)用于后續實驗。
5. 用酶標儀(yi)測定(ding)在(zai)450 nm處的吸光值(zhi)，若無450nm濾(lv)光片，可以使用420-480nm 的濾(lv)光
片。如(ru)果(guo)樣品為(wei)高(gao)渾(hun)濁度(du)的(de)細(xi)胞懸液，可以使用大于 600nm的(de)波(bo)長(chang)，例(li)如(ru)650nm，作為(wei)參(can)考(kao)波(bo)長(chang)進行雙波(bo)長(chang)測定。
6. 如果需要(yao)暫時(shi)不測定(ding) OD值，可以向每孔中加(jia)入10 μl0.1MHCl 溶液或者1%(w/v)的 SDS溶液，避光保存在(zai)室溫，24 小(xiao)時(shi)內吸光度不會(hui)發生變(bian)化。
● 注意事項：
1. 使(shi)用96 孔板進行(xing)檢測時，如果細胞培(pei)養時間較(jiao)長，請注意(yi)蒸(zheng)發問(wen)題。可將96 孔板外圍一圈加培(pei)養基、水或 PBS保濕。同時，可以(yi)把96孔板置(zhi)于培(pei)養箱內靠近(jin)水盤的(de)位置(zhi)以(yi)緩解蒸(zheng)發。
2. 培養(yang)時(shi)間根據細胞(bao)種類的不同和每孔內細胞(bao)數量的多(duo)少(shao)而不同。在正式實(shi)驗(yan)(yan)前，建議先(xian)做預實(shi)驗(yan)(yan)摸索鋪板的細胞(bao)數量以及加入CCK-8 試劑后(hou)的培養(yang)時(shi)間。
3. 鋪(pu)板(ban)時請注意保證每(mei)個孔細(xi)(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)均(jun)勻(yun)，建(jian)議(yi)鋪(pu)板(ban)過程(cheng)中(zhong)注意時常混勻(yun)，防止因(yin)細(xi)(xi)胞(bao)沉淀造成不均(jun)勻(yun)。加入CCK-8 后(hou)請前后(hou)左右輕輕晃動培(pei)養板(ban)數(shu)次，使培(pei)養基和CCK-8 溶(rong)液充(chong)分混勻(yun)。
4. 本試劑盒的(de)檢(jian)測依賴于脫氫(qing)酶催(cui)化的(de)反應(ying)，如(ru)果(guo)待測物質(zhi)有氧化性或(huo)還原(yuan)性，可(ke)(ke)在加CCK-8 之前更(geng)換新鮮培(pei)養(yang)基，去掉藥(yao)物的(de)影響。若藥(yao)物影響比較小的(de)情況可(ke)(ke)以不更(geng)換培(pei)養(yang)基，直(zhi)接扣除培(pei)養(yang)基中加入藥(yao)物后的(de)空白吸收即可(ke)(ke)。
5. 加(jia)入CCK-8 時，如果細胞培(pei)養時間(jian)較長，培(pei)養基顏(yan)色或 pH值已變化，建議換(huan)用新鮮的培(pei)養基。
6. 用酶標儀檢(jian)測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。
7. 本試劑(ji)盒系無菌灌裝生(sheng)產。在使(shi)用過程中，請在生(sheng)物安(an)全柜內無菌操作，避免污染。
CCK-8
使用該(gai)產品(pin)發表(biao)部(bu)分文章(zhang)列表(biao)：
1. [2022 IF=2.6] Upregulation of
Protease-Activated Receptor 2 Promotes Proliferation and Migration of Human
Vascular Smooth Muscle Cells (VSMCs).
Author: Mei Wei, Yongsheng Liu, Mingqi Zheng, Le Wang, Fangfang
Ma, Yanchao Qi, Gang Liu
Journal: Medicine Science Monotor. 2019; 25:
8854-8862
Institution：The First Hospital of Hebei Medical
University
Paper link：