超低分子量蛋白電泳試劑盒（貨號：RTD6120）
● 產品組成：
|
組分貨號
|
組分
|
名稱
|
規格
|
貯(zhu)存
|
運(yun)輸
|
|
RTD6120-01
|
組分1
|
2×多肽電(dian)泳(yong)濃縮膠(jiao)緩(huan)沖液
|
15 ml
|
4℃
|
常溫
|
|
RTD6120-02
|
組分2
|
2×多肽電泳分離膠緩沖液
|
30 ml
|
4℃
|
常溫
|
|
RTD6120-03
|
組分3
|
2×PAA溶液 超低(di)濃縮膠用
|
15 ml
|
4℃
|
常溫
|
|
RTD6120-04
|
組分4
|
2×PAA溶液 超低(di)分離(li)膠用
|
30 ml
|
4℃
|
常溫(wen)
|
|
AP020P
|
組分5
|
10% APS（干粉）
|
5 ml
|
常溫
|
常溫
|
|
TA0761-01
|
組分6
|
TEMED
|
0.5 ml
|
常溫
|
常溫
|
|
CB010P
|
組分7
|
10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)
|
500 ml（干粉）
|
常溫(wen)
|
常溫
|
|
TP050
|
組分8
|
2×Tricine 上樣緩沖液（含(han)還(huan)原(yuan)劑）
|
1 ml
|
-20℃
|
常溫
|
|
RTD6202-02
|
組分(fen)9
|
FastBlue蛋(dan)白染色液(ye)
|
500 ml
|
常溫
|
常溫
|
● 產品簡介：
本試劑盒含有超低分子量蛋白電泳（多肽電泳）全套試劑，可以用來檢測1-20kd的多肽(tai)大(da)小。本(ben)試劑(ji)盒(he)可(ke)配制至少10塊(kuai)常規大(da)小的PAGE膠（8×10cm）。具有以下特點：
1 適用范圍廣：2×多肽電(dian)泳緩(huan)沖液(ye)和(he)2×PAA溶液(ye)中不含有SDS，適用于多肽的變(bian)性和(he)非變(bian)性電(dian)泳。
2 分辨率高(gao)：凝膠緩(huan)沖液獨特配方，可以有(you)效(xiao)分離1-5kD多肽。
3 穩定性高(gao)：凝膠緩沖液(ye)pH為中性，存放時間長。
4 使(shi)用(yong)方便：配制凝膠(jiao)(jiao)時只需1:1混合2×凝膠(jiao)(jiao)緩沖液(ye)和(he)2×PAA溶液(ye)，加上APS和(he)TEMED即可配制凝膠(jiao)(jiao)。
● 貯存和效期：
按照標簽溫度貯存；開(kai)封(feng)后有效期(qi)一年。
● 使用說明：
一. 10% APS配制：
10% APS配制-5 ml：將APS干粉溶于5 ml滅菌水中，徹底(di)溶解后(hou)分裝(zhuang)，1 ml/支，-20℃備(bei)存，每次取一(yi)管使用。10% APS應盡量(liang)減(jian)少常溫存放時間(jian)，以防失效。10%APS在4℃有效期(qi)(qi)為一(yi)周，-20℃有效期(qi)(qi)6個月。若發(fa)現凝膠(jiao)聚合時間(jian)延長，應考慮更(geng)換使用-20度(du)保存的10% APS。
二. 制膠：
I 配制分離膠
1．按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯或離心管中混合；立即混勻5-10秒，以(yi)使溶(rong)液充(chong)分(fen)混(hun)勻。
表一 （一塊1 mm mini膠用量）*
|
|
分(fen)離(li)膠
|
濃(nong)縮膠(jiao)
|
|
|
18％T /5 ml
|
5％T /2 ml
|
|
2×多肽電泳濃縮膠緩(huan)沖液
|
/
|
1 ml
|
|
2×多(duo)肽電泳分(fen)離膠緩沖(chong)液
|
2.5 ml
|
/
|
|
2×PAA溶(rong)液(ye) 超低濃(nong)縮膠用
|
/
|
1 ml
|
|
2×PAA溶液 超低分離膠用
|
2.5 ml
|
/
|
|
10％APS
|
25-50 μl**
|
20-30 μl
|
|
TEMED
|
2.5-5 μl
|
2 μl
|
注： * 如非(fei)必須，不要使(shi)用(yong)(yong)厚度(du)1.5mm的凝膠(jiao)，盡量使(shi)用(yong)(yong)厚度(du)0.75m和1mm的凝膠(jiao)，這樣會(hui)減少電泳后染色和脫(tuo)色的時間。
** 凝膠的聚合(he)時(shi)(shi)間與環(huan)境溫(wen)度有關(guan)。夏天溫(wen)度較高(gao)時(shi)(shi)，聚合(he)較快；冬(dong)天氣溫(wen)低時(shi)(shi)，聚合(he)時(shi)(shi)間會延長。可以根據表二的標(biao)準(zhun)條件(jian)調節催化劑的加入量(liang)。
表(biao)二 超低凝膠制備凝固時間表(biao)
|
環(huan)境溫度
|
20℃
|
25℃
|
|
|
分離膠(jiao)配(pei)制
|
濃(nong)縮(suo)膠配制
|
分離膠配制(zhi)
|
濃縮膠配(pei)制
|
|
分離膠配(pei)制量(liang)
|
5 ml
|
-
|
5 ml
|
-
|
|
濃縮膠配制量
|
-
|
2 ml
|
-
|
2 ml
|
|
10%APS
|
50 μl
|
20 μl
|
25 μl
|
20 μl
|
|
TEMED
|
5 μl
|
2 μl
|
2.5 μl
|
2 μl
|
|
凝固時間
|
5-10 分鐘
|
20-30 分鐘
|
5-10 分鐘
|
20-30 分鐘
|
2．在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液，然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無水(shui)乙醇層，使凝膠表面保(bao)持平整。
3．靜置5-10分鐘(zhong)，待分離膠(jiao)和(he)乙醇(chun)層(ceng)之間出(chu)現(xian)一個清(qing)晰的界面表示凝膠(jiao)已聚合。
II 配制濃縮膠
去除覆蓋在分離膠(jiao)上的水(shui)層，用(yong)濾(lv)紙將殘留的水(shui)吸去。
1．按照表一(yi)將不同成分加入到(dao)小燒杯或離心管中(zhong)混(hun)合(he)；立即混(hun)勻5-10秒，以(yi)使溶液充分混(hun)勻。
2．將梳子插(cha)入凝膠內，避免產(chan)生氣泡。
3．靜置20-30分鐘(zhong)待凝膠聚合
三. 電泳：
1. 10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制：
將10×Tricine-Tris-SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一干凈的一升燒杯中，加入500ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500ml 10×TTS緩(huan)沖(chong)液。
表三 1×TTS緩沖液配制
|
|
1×TTS配制量 500 ml
|
1×TTS配制量 1000 ml
|
|
10×TTS
|
50 ml
|
100 ml
|
|
超純水
|
450 ml
|
900 ml
|
注：伯樂(le)Mini III電泳槽一(yi)次電泳使用(yong)500ml 1×TTS緩沖液。
2. 樣品處理：
待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat No：TP050]等體積混合，95℃處理5-10分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經含有上樣緩沖液，根據說明書上樣（預染Marker不能加熱處理，非預染Marker上樣前一般要95℃處理5-10分鐘）。
將電泳槽的內槽加滿1×TTS緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器將梳孔吹洗干凈，將Marker或蛋白樣品（已經過處理）加入點樣孔，穩壓電泳（表四），至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時即可停止電泳。整個電泳過程大約需要2.5-3個小時。
表四 多肽電泳條件
|
恒電壓(ya)
|
150V
|
|
起始電流(liu)
|
60-75mA/板膠
|
|
結束電流
|
15-25mA/板膠
|
|
電泳時間(jian)
|
2.5-3小時
|
四. 染色（使用組分9-FastBlue蛋白染色液）：
● 用前必讀：
1 使用前如發現瓶中有少許沉淀，請混勻后使用。
2以下“使用方法”是針對0.75mm和1.0
mm厚度，10×10cm凝膠染色程序。
● 使用方法：
1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑(su)料容器中(zhong)，加入適(shi)量染色液(ye)（以剛(gang)剛(gang)覆(fu)蓋過膠面(mian)為適(shi)），條帶1-2分(fen)鐘即(ji)可見(jian)。
2. 搖床(chuang)上(shang)常溫搖動10-15分(fen)鐘(zhong)。
3. 觀察(cha)結果。
● 注意事項：
1. 使用方法中的(de)(de)各種參(can)數(shu)僅針對面(mian)積(ji)8×10cm或10×10cm，厚(hou)度(du)0.75mm和(he)1mm的(de)(de)凝膠(jiao)，如果使用更大(da)面(mian)積(ji)或更厚(hou)的(de)(de)凝膠(jiao)，請加(jia)入更多的(de)(de)染(ran)色液(ye)并(bing)延長染(ran)色的(de)(de)時間。
2. 常規染(ran)色所(suo)需的(de)漂洗，固定，脫色步驟都無(wu)必要(yao)。
3. 本染(ran)色液可以重復(fu)利用1-2次(ci)，敏感性會(hui)有輕微下(xia)降，請(qing)延長染(ran)色時(shi)間。
4.
本染(ran)色液有輕微腐蝕性，請(qing)帶手套(tao)操作。使用后，請(qing)蓋(gai)好(hao)瓶蓋(gai)，常溫密封保存。
緩沖液配方：
1.
10x Tricine-Tris-SDS緩沖液 (1
L) (Cat No:CB010P)
組(zu)分濃度：1 MTris,1 MTricine, 1% SDS
Tris
base 121.1 g
Tricine 179.2 g
SDS 10 g
ddH2O to1 L
Do not
adjust the pH (~pH 8.3)
2. 2×Tricine蛋(dan)白(bai)樣品加樣緩沖液（10ml） (Cat No:TP050)
組分濃度：100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT，0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250
1ml 1MTris-Cl pH6.8
2.4ml 甘油
0.8g SDS
0.31gDTT
2mg 考馬斯亮藍(lan)G-250
用滅菌ddH2O定容至(zhi)10ml
混勻分裝-20℃貯存備用
多肽電泳配套試劑
使用該產品發表部分文章列表：
1. [2016 IF=1.75] Metal-Chelate Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer
for Purification of ε-Poly-L-Lysine.
Product：RTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒
Author: Sipeng Li, Zhaoyang Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao.
Journal: Appl Biochem
Biotechnol. May 20 2017.
Institution：East
ChinaUniversity of Science and Technology
Paper link：
2. [2020 IF=2.896] Rapid and sensitive detection of
Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia based on bacitracin-modified
Fe3O4@PDA magnetic beads combined with matrix-assisted laser desorption
ionization-time of flight mass spectrometry.
Product：RTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒；RTD6110 彩虹預染超低分子量蛋白Marker
Author: Feng Qin，Xiangmin Zhang
Journal: Analytical
Methods 2021，13，2804
Institution： Department of Chemistry, Fudan
University,
Paper link：