彩虹預(yu)染(ran)超(chao)低(di)分子(zi)量(liang)蛋(dan)白質(zhi)Marker II（3-40 kD）
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight
Protein Marker II（3-40 kD）
●產品(pin)編號及規格(ge)：
RTD6145-01 10 T（50 μl）
RTD6145-02 50 T（250 μl）
● 儲存條件：
-20℃保存，有效期12個月
● 產品簡介：
彩虹(hong)預染超低分(fen)子量蛋(dan)白質Marker II可以直接觀察(cha)蛋白(bai)電泳及(ji)清晰判斷Western Blotting的轉膜效果。本(ben)產品由9種多肽和(he)蛋白質(zhi)組成(cheng)，分子量大小為 3 kD，4.2 kD，6.5 kD，10 kD（綠色），15 kD，20 kD，25 kD，30 kD，40 kD（紅色(se)） (注(zhu)：蛋白(bai)(bai)大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用(yong)非預染(ran)蛋白(bai)(bai)Marker標定(ding)過。)。
● 使(shi)用說明：
第(di)一(yi)次收(shou)到該產(chan)品，常(chang)溫融化(hua)后，徹底混(hun)勻，離心快甩將溶(rong)液(ye)完全收集(ji)到管底。
一. 制膠：
I 配(pei)制分離(li)膠
1．按照表一將不同體積的(de)雙蒸水、40% PAA（19:1）、凝膠緩沖(chong)液(ye)和(he)乙二醇(chun)加入到(dao)小燒(shao)杯(bei)中(zhong)混合。
2．加(jia)入10%APS和(he)TEMED，立即(ji)混勻5-10秒，以(yi)使溶液充分混勻(yun)。
3．在(zai)凝(ning)膠(jiao)模(mo)具中(zhong)迅速灌入適量分離膠(jiao)溶(rong)液，然(ran)后在(zai)分離膠(jiao)溶(rong)液上輕輕覆(fu)蓋一(yi)層1
cm的無(wu)水(shui)乙(yi)醇，使凝膠表面保持平整(zheng)。
4．靜置15-30分鐘，待分離膠和乙醇(chun)層(ceng)之(zhi)間出現一(yi)個清晰的界(jie)面表示凝(ning)膠已聚合。
表一(yi) （一塊(kuai)1 mm mini膠用量）
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分離膠
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濃(nong)縮膠
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18％T, 5%C /5 ml
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5％T, 3.3%C/2 ml
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40% PAA（19:1）
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2.25 ml
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40% PAA (29:1)
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0.25 ml
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4×凝膠緩(huan)沖液
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1.25 ml
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0.5 ml
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乙二(er)醇（電泳級）
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1.5 ml
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ddH2O
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/
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1.25ml
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10％APS
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50 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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II 配(pei)制(zhi)濃縮膠
去(qu)除(chu)覆蓋在分(fen)離膠上的乙醇層，用(yong)濾紙將(jiang)殘留乙醇吸去(qu)。
1．按照表一將不同(tong)體積的雙蒸水、40%PAA（29:1）和凝膠緩(huan)沖液(ye)加入(ru)到小燒杯中(zhong)混(hun)合。
2．加入(ru)10%過(guo)硫酸銨和TEMED，立即混勻(yun)5-10秒(miao)，以使溶(rong)液充分混勻(yun)。
3．將梳子插入凝膠(jiao)內，避免產生氣泡(pao)。
4．靜置30-60分鐘裝待(dai)凝膠聚(ju)合
二. 電泳：
1. 取(qu)Marker樣品，充(chong)分混勻后備用。不要加熱處理。
2. 電(dian)泳(yong)(yong)(yong)(yong)前，將(jiang)10×陽極(ji)緩(huan)沖液(ye)（Cat No：AB080）和10×陰(yin)(yin)極(ji)緩(huan)沖液(ye)（Cat No：CB010）用蒸餾水稀釋成(cheng)1×緩(huan)沖液(ye)備用。將(jiang)電(dian)泳(yong)(yong)(yong)(yong)槽的外(wai)槽加入1×陽極(ji)緩(huan)沖液(ye)，內槽加入1×陰(yin)(yin)極(ji)緩(huan)沖液(ye)，輕(qing)柔拔出梳子，將(jiang)Marker或蛋白樣品(pin)（已經過2×Tricine上樣緩(huan)沖液(ye)[Cat No：TP050]處理(li)）加入點樣孔，參考下(xia)表進行(xing)電(dian)泳(yong)(yong)(yong)(yong)，至每(mei)條帶都清(qing)晰(xi)可(ke)見時停止(zhi)電(dian)泳(yong)(yong)(yong)(yong)。整(zheng)個電(dian)泳(yong)(yong)(yong)(yong)過程大約需要2-3個小(xiao)時。
表(biao)二(er) 多肽電泳條件(jian)
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恒電壓
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150V
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起(qi)始電流
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60-75mA/板(ban)膠
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結束(shu)電流
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15-25mA/板膠(jiao)
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電泳(yong)時間
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2.5-3小時
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三. 染色
根據常規實驗步驟，用(yong)配方6和(he)7（表三）進行(xing)染色和(he)觀察。如果(guo)使用(yong)配方6進行(xing)染色時效果(guo)不好或(huo)考慮其毒性，請選擇本公司的考馬(ma)斯亮(liang)藍蛋白膠(jiao)快速染色液（Cat No：RTD6201），該產(chan)品除具有(you)染色(se)快，無毒(du)，靈敏(min)性高等特點外，還能對(dui)小肽在染色(se)中(zhong)起到固定作用，不至(zhi)于小肽在染色(se)和脫(tuo)色(se)中(zhong)從(cong)凝膠中(zhong)脫(tuo)離，是常規染色(se)液(ye)的理想替(ti)代品。
注(zhu)：預(yu)染(ran)蛋白Marker由于嵌合了染(ran)料，在不同的(de)(de)凝膠系統中遷移率會有不同，因此只能用(yong)來(lai)粗略估計目的(de)(de)蛋白的(de)(de)大小。如(ru)要精確確定(ding)(ding)蛋白的(de)(de)大小，請在同一凝膠系統中用(yong)非預(yu)染(ran)蛋白Marker來(lai)標(biao)定(ding)(ding)預(yu)染(ran)蛋白Marker的(de)(de)分子量。
表三 小分(fen)子蛋(dan)白質SDS-PAGE電泳試劑配(pei)制(zhi)
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1. 40%PAA（29:1）（配制濃縮(suo)膠(jiao)）
貨號： AC2914
丙稀(xi)酰(xian)胺 38.67g
甲(jia)叉雙丙(bing)稀酰胺(an) 1.33g
用ddH2O溶解后定容至(zhi)100
ml，過濾后使用。
貯存(cun)：4℃
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2. 40% PAA（19:1） （配制分離膠）
貨(huo)號：AC1914
丙(bing)稀(xi)酰胺 38 g
甲叉雙丙(bing)稀(xi)酰胺 2 g
用(yong)ddH2O溶(rong)解后定容至100
ml，過濾后(hou)使(shi)用。
貯存：4℃
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3. 4×凝膠緩(huan)沖液（配制凝膠用）
貨(huo)號：GB010
[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris堿 36.3 g；ddH2O 80ml
0.4
g SDS或4 ml 10％ SDS
用(yong)HCl調pH值至8.45；用ddH2O定容至100
ml
貯存：4℃
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4. 10×陽極緩沖(chong)液(ye)（下槽緩沖(chong)液(ye)）
貨號：AB080
[2
M Tris pH8.9]
Tris堿 121.1g；ddH2O 400ml；用HCl調(diao)pH值至8.9；用ddH2O定容至500ml
貯存：4℃
注：使(shi)用前稀釋成(cheng)1×陽極緩沖(chong)液使用。
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5. 10×陰極緩(huan)沖(chong)液（上槽緩(huan)沖(chong)液）
貨號：CB010
[1
M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris堿 121.14g；Tricine 179.2g；SDS 10 g
用(yong)ddH2O溶解，定容至1000
ml(不(bu)用調pH)。
貯(zhu)存(cun)：4℃
注：使用前稀釋(shi)成(cheng)1×陰極緩沖(chong)液使用
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6. 染色液(ye)
貨號：RTD6203
冰醋酸 100 ml
考(kao)馬斯亮(liang)藍G-250 0.25 g
水(shui) 900 ml
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7. 脫色液
貨號：RTD6204
冰(bing)醋酸 100 ml
水 900 ml
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8. 2×Tricine蛋白樣品上樣緩沖液（10ml）
貨號：TP050
1ml1MTris-HCl pH6.8；2.4
ml 甘油(you)；0.8 g SDS；0.31
g DTT（或者(zhe)400 μl β-巰基乙醇）；2
mg 考馬斯亮(liang)藍G-250；用滅(mie)菌水定(ding)容至10ml
混(hun)勻分裝-20℃貯(zhu)存(cun)備用
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多肽電泳配套(tao)試劑
使用RTD6145 彩虹預染超低分子量Marker
II（3-40 kD）產品發表部分文章列表：
1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for
spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2
Author: Xiaowei
Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao
Zhang, Vijaya Raghavan
Marker: RTD6145
彩虹預(yu)染超低(di)分(fen)子量Marker
II（3-40kD）
Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458
Institution: Nanjing
Agricultural University
Paper link：