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RealPAGE plus彩色(se)凝膠快速制備試劑盒(he)

 RealPAGE plus Colour Gel Fast Preparation Kit

●  貨(huo)品規格：

●  貨品內容：

● 產(chan)品(pin)簡介：

該產(chan)品(pin)利用聚(ju)丙(bing)烯(xi)酰胺(an)凝(ning)膠電(dian)泳原(yuan)理(li)，采用合理(li)設(she)計的預混合配方和(he)(he)配制(zhi)(zhi)流程，可在50分鐘內配制(zhi)(zhi)得到高質(zhi)量的聚(ju)丙(bing)烯(xi)酰胺(an)凝(ning)膠，用于變性(xing)和(he)(he)非變性(xing)蛋白(bai)凝(ning)膠電(dian)泳。本產(chan)品(pin)可以配制(zhi)(zhi)常用分離膠濃度6%、8%、10%、12%和(he)(he)15%，可以滿(man)足(zu)絕(jue)大多數蛋白(bai)電(dian)泳需求。

本試(shi)劑盒大約可(ke)以配(pei)制(zhi)60-125塊(kuai)常規大小（8×10cm）PAGE凝膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)，具(ju)體數量根據(ju)凝膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)厚度決定：0.75mm厚度凝膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)可(ke)以配(pei)制(zhi)125塊(kuai)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)，1mm厚度凝膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)可(ke)以配(pei)制(zhi)至(zhi)(zhi)少90塊(kuai)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)，1.5mm厚度凝膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)可(ke)以配(pei)制(zhi)至(zhi)(zhi)少60塊(kuai)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)。

● 運輸和貯存(cun)：

本產品常溫(wen)運輸；組份(fen)按照標(biao)簽溫度貯存；有效期(qi)一年。

● 特點：

1. 方(fang)便：彩色(se)上層(ceng)(ceng)膠(jiao)，方(fang)便上樣；上層(ceng)(ceng)膠(jiao)和下層(ceng)(ceng)膠(jiao)溶(rong)液1:1混合，無需計算；

2. 安全(quan)：不用(yong)接(jie)觸有毒(du)粉(fen)末；不用(yong)單獨添加(jia)TEMED；

● 使用說明：

一  凝(ning)膠制備(bei)：

1.1參照凝膠模(mo)具說明書，裝配好凝膠模(mo)具。

1.2 根據(ju)下表(biao)參考選擇合適的凝膠濃(nong)度

表(biao)一不同濃度的(de)PAGE下(xia)層膠的(de)最(zui)佳分(fen)離范(fan)圍(wei)

1.3 根據下表配制凝膠：

表(biao)(biao)二 凝膠(jiao)配制表(biao)(biao)

1.3.1 取等體積下層膠溶(rong)液B 和下層膠溶(rong)液A ，各(ge) 2.0/2.5/4.0 ml，混勻；

1.3.2混合溶液中加入 40/50/80 μl的(de)改(gai)良型促凝劑，輕(qing)輕(qing)混勻，將(jiang)混勻后(hou)的(de)溶液注入制(zhi)膠玻璃板(ban)中，使液面和短玻璃板(ban)上沿之間(jian)的(de)距(ju)離比梳齒長(chang)0.5 cm即可；

注意(yi)：此溶液為過量，請勿全部注入。

1.3.3 沿玻璃板緩慢加入適(shi)量(liang)滅菌(jun)水或(huo)無水乙(yi)醇覆蓋于下層(ceng)膠之上，待(dai)下層(ceng)膠凝固后，倒去上層(ceng)水或(huo)乙(yi)醇；

注(zhu)意：當(dang)水（乙(yi)醇）和膠之間有一條折射線(xian)時，說明膠已凝固；25℃時5-10分鐘可以聚合(he)。

1.3.4 取等體積彩色上層膠溶液B和上層膠溶液A ，各(ge) 0.5/0.75/1.0 ml，混勻；

1.3.5向混(hun)(hun)合溶液(ye)中加(jia)入 10/15/20 μl 的改良型促凝劑(ji)，輕輕混(hun)(hun)勻，插入梳齒；

1.3.6 待上層膠凝固(gu)后 （約20-40 min），拔去梳(shu)齒(chi)即可(ke)用于(yu)電泳。

注：凝膠的(de)聚(ju)合時間(jian)與環境溫度(du)有關(guan)。夏天溫度(du)較高(gao)時，聚(ju)合較快；冬天氣溫低時，聚(ju)合時間(jian)會延長(chang)。

上(shang)層(ceng)膠25℃ 20-25分鐘可以聚(ju)合；18℃ 35-40分鐘可以聚(ju)合。

二(er)  電泳(yong)：

2.1 SDS-PAGE變性電(dian)泳(yong)：

2.1.1電泳緩(huan)沖液配制：

將5×Tris-甘氨(an)酸-SDS電泳(yong)(yong)緩沖液干粉(fen)（自備，組(zu)份(fen)0.96 M 甘氨(an)酸，0.125 M Tris，0.5% SDS）全部倒入1L燒(shao)杯中，加(jia)入約900 ml水(shui)徹(che)底(di)溶解(jie)，用(yong)水(shui)定容至1 L，即配成(cheng)(cheng)5×Tris-甘氨(an)酸電泳(yong)(yong)緩沖液（此溶液不(bu)用(yong)調節pH值）。用(yong)前再稀釋5倍即配成(cheng)(cheng)1×Tris-甘氨(an)酸-SDS電泳(yong)(yong)緩沖液。

2.1.2 樣(yang)品(pin)處理：融化-混(hun)合(he)-變性-上樣(yang)

5×MonoColor蛋(dan)(dan)白(bai)上樣緩(huan)沖液(ye)常溫數分鐘(zhong)解凍后輕輕搖勻，以確(que)保(bao)溶液(ye)混(hun)合均勻；將(jiang)緩(huan)沖液(ye)與(yu)蛋(dan)(dan)白(bai)樣品按照1：4的比例混(hun)勻，如8 μl樣品加入2 μl 5×上樣緩(huan)沖液(ye)；將(jiang)蛋(dan)(dan)白(bai)樣品置于95℃中加熱5-10分鐘(zhong)；蛋(dan)(dan)白(bai)樣品加入凝膠加樣孔內電泳(yong)。

2.1.3 電泳過程；

在(zai)電泳(yong)槽(cao)的(de)內槽(cao)內加(jia)入1×Tris-甘(gan)氨酸-SDS電泳(yong)緩(huan)沖(chong)液(讓電泳(yong)緩(huan)沖(chong)液漫過加(jia)樣(yang)孔)，輕輕的(de)撥出梳子，用(yong)1ml吸頭徹底沖(chong)洗加(jia)樣(yang)孔，隨(sui)后在(zai)電泳(yong)槽(cao)外槽(cao)加(jia)入適量的(de)1×Tris-甘(gan)氨酸-SDS電泳(yong)緩(huan)沖(chong)液。

表三(san) SDS-PAGE電泳條(tiao)件(jian)

2.2 非變性電(dian)泳（Native PAGE）：

2.2.1電泳緩沖(chong)液(ye)配制：

將5×Tris-甘(gan)氨(an)酸電泳緩(huan)沖液(ye)(ye)干(gan)粉（自備，組份(fen)0.96 M 甘(gan)氨(an)酸，0.125 M Tris）全部倒入(ru)(ru)1L燒杯中，加入(ru)(ru)約900 ml水(shui)(shui)徹底溶(rong)解，用水(shui)(shui)定容至1 L，即配(pei)(pei)成5×Tris-甘(gan)氨(an)酸電泳緩(huan)沖液(ye)(ye)（此溶(rong)液(ye)(ye)不用調節pH值）。用前(qian)再稀(xi)釋5倍即配(pei)(pei)成1×Tris-甘(gan)氨(an)酸-SDS電泳緩(huan)沖液(ye)(ye)。

2.2.2 樣(yang)品處(chu)理：融(rong)化-混合-上樣

5×非(fei)變性(xing)非(fei)還原蛋白(bai)上樣(yang)緩沖液(ye)常溫(wen)數(shu)分(fen)鐘解凍后輕輕搖勻，以確保(bao)溶液(ye)混(hun)合(he)均(jun)勻；將緩沖液(ye)與(yu)蛋白(bai)樣(yang)品(pin)按照1：4的比例混(hun)勻，如8 μl樣(yang)品(pin)加(jia)(jia)入(ru)2 μl 5×上樣(yang)緩沖液(ye)；蛋白(bai)樣(yang)品(pin)加(jia)(jia)入(ru)凝(ning)膠加(jia)(jia)樣(yang)孔內(nei)電泳(yong)。注：非(fei)變性(xing)電泳(yong)樣(yang)品(pin)不(bu)能加(jia)(jia)熱處理。

2.2.3 電泳過(guo)程；

在(zai)電(dian)泳(yong)(yong)槽的內槽內加(jia)入(ru)1×Tris-甘氨(an)酸電(dian)泳(yong)(yong)緩沖液(讓電(dian)泳(yong)(yong)緩沖液漫(man)過加(jia)樣孔(kong))，輕輕的撥出(chu)梳子，用1ml吸頭徹底沖洗加(jia)樣孔(kong)，隨后在(zai)電(dian)泳(yong)(yong)槽外槽加(jia)入(ru)適量的1×Tris-甘氨(an)酸電(dian)泳(yong)(yong)緩沖液。

表(biao)四(si) Native PAGE電泳條件

三. 染色：

1. 將(jiang)電(dian)泳后的PAGE膠取下(xia)放入(ru)塑料容器中，加入(ru)適量FastBlue蛋白(bai)染色(se)液或常(chang)規考馬斯亮藍染色(se)液（以剛(gang)剛(gang)覆蓋過膠面(mian)為適），條帶1-2分鐘即(ji)可見。

2. 搖(yao)床常溫搖(yao)動10-15分鐘至條帶清晰可(ke)見。

3. 加入適量蒸餾(liu)水(shui)脫色(se)，期間更換1-2次蒸餾(liu)水(shui)，搖床常溫搖動10-15分(fen)鐘至背景干(gan)凈。

四. 實(shi)驗示例(li)：